декабря 2025

Нами выявлен бактериальный штамм Exiguobacterium mexicanum 6, который является продуцентом новой эндонуклеазы рестрикции, названной EmiI. Фермент EmiI узнает шестинуклеотидную непалиндромную последовательность ДНК 5’-CTCTTC-3’ и расщепляет ее в стороне от сайта узнавания в позициях 1/4: 5’-CTCTTC(N)1↓-3’/3’-GAGAAG(N)4↓-5’ с образованием 5’-выступающих трехнуклеотидных концов. Таким образом, EmiI является изошизомером рестриктаз Ksp632I и Bst6I . Штамм-продуцент идентифицировали по морфологическим и биохимическим признакам, а также по анализу первичной структуры фрагмента гена 16S рРНК. Препарат эндонуклеазы рестрикции EmiI с концентрацией 5000 е.а./мл был получен путем очистки в три хроматографические стадии. Оптимальными условиями работы фермента являются SE-буфер Y (33 мМ Трис-ацетат (pH 7,9), 10 мМ Mg-ацетат, 66 мМ K-ацетат, 1 мМ ДТТ) и температура 37°С.

Обнаружен штамм бактерии Microbacterium oxydans являющийся продуцентом 5-метилцитозин-зависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы MoxI, которая узнает и расщепляет в ДНК последовательность 5’-R(5mC)↓GY-3’/3’YG↓(5mC)R-5’. Ген moxI клонирован в составе вектора E.coli, получен препарат рекомбинантного фермента и изучены его свойства. Показано, что сайт узнавания ДНК-эндонуклеазы MoxI совпадает с сайтом узнавания 5mC-зависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы GlaI. Однако новый фермент, в отличие от GlaI, проявляет максимальную активность при 37°С и с большей эффективностью расщепляет последовательность узнавания с двумя 5-метилцитозинами