Gla I

Обнаружен штамм бактерии Microbacterium oxydans являющийся продуцентом 5-метилцитозин-зависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы MoxI, которая узнает и расщепляет в ДНК последовательность 5’-R(5mC)↓GY-3’/3’YG↓(5mC)R-5’. Ген moxI клонирован в составе вектора E.coli, получен препарат рекомбинантного фермента и изучены его свойства. Показано, что сайт узнавания ДНК-эндонуклеазы MoxI совпадает с сайтом узнавания 5mC-зависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы GlaI. Однако новый фермент, в отличие от GlaI, проявляет максимальную активность при 37°С и с большей эффективностью расщепляет последовательность узнавания с двумя 5-метилцитозинами

В настоящей работе описано клонирование сайт-специфической метилзависимой ДНК-эндонуклеазы GlaI и проведено сравнение субстратной специфичности рекомбинантного и нативного ферментов. Проведённый анализ свойств рекомбинантной эндонуклеазы GlaI показал, что субстратная специфичность нативного и рекомбинантного фермента не отличаются, но, ввиду большего количества фермента в рекомбинантном штамме, его концентрация в конечном препарате более чем в 10 раз превышает концентрацию нативного фермента