ДНК-узнающие ферменты

ПЦР в реальном времени с использованием TaqMan зонда (ПЦР РВ) является одним из основных методов анализа структуры ДНК человека и широко используется в медицине. В данной работе проводили ПЦР РВ 4-х фрагментов геномной ДНК человека (chr1: 90717178-90717300, chr9: 97464604-97464756, chr11: 65647215-65647307, chr17: 4560027-4560175), используя в качестве матрицы препараты ДНК из крови человека, полученные как стандартным методом фенольной депротеинизации, так и выделенные на колонках. В ПЦР использовались как препараты исходной ДНК, так и после ее обработки рестриктазой, выщепляющей амплифицируемый фрагмент. В случае препаратов нативной ДНК, очищенных на колонках, ПЦР на 3-х из 4-х фрагментов ДНК дает завышенное значение Cq. В случае фенольной очистки завышенное значение Cq для препаратов нативной ДНК получается для 2-х из 4-х фрагментов ДНК. В случае препаратов ДНК, полученных после очистки на колонке, обработка ДНК эндонуклеазой рестрикции, вырезающей амплифицируемый фрагмент,…

В настоящей работе описано клонирование сайт-специфической метилзависимой ДНК-эндонуклеазы GlaI и проведено сравнение субстратной специфичности рекомбинантного и нативного ферментов. Проведённый анализ свойств рекомбинантной эндонуклеазы GlaI показал, что субстратная специфичность нативного и рекомбинантного фермента не отличаются, но, ввиду большего количества фермента в рекомбинантном штамме, его концентрация в конечном препарате более чем в 10 раз превышает концентрацию нативного фермента